ABSTRACT
A engenharia de tecidos tem como objetivo substituir tecidos danificados, manipulando células, confecção de arcabouços e a utilização de moléculas que estimulem o tecido. A proposta deste estudo foi avaliar duas técnicas de cultivo de células-tronco mesenquimais (MSC) em diferentes placas de cultura, utilizando dois tipos de telas de polipropileno (macroporoso e microporoso), para obter as melhores condições de interação entre a tela e as células, e definir uma proposta de protético para engenharia de tecidos. As telas de polipropileno foram cultivadas com células-tronco mesenquimais de tecido adiposo (ADSCs) isoladas de camundongos C57B1/6 GFP+ durante quinze dias em placas revestidas com metacrilato ou não revestidas com metacrilato. A quantidade de ADSCs aderidas foram verificadas diariamente em Câmara de Neubauer e através de uma curva de crescimento realizada pelo ensaio MTT. As ADSCs aderidas às malhas foram visualizadas com marcação de DAPI, panóticas, hematoxilina e eosina imuno-histoquímica e imunofluorescência. O melhor protocolo foi na tela microporosa, no o período de sete dias de cultivo e em placas sem metacrilato. Conclui-se que a tela de polipropileno fornece um bom suporte para as ADSCs se aderirem podendo ser utilizada na engenharia de tecidos.
Tissue engineering replaces injured tissues by manipulating cells, making scaffolds, and using molecules that stimulate the tissue. Mesenchymal stem cells (MSCs) are good candidates for tissue engineering, as this is one of the cell types which are recruited to repair injured tissues. Scaffolds are structural devices that allow cell fixation and migration, with polypropylene meshes being an example. This study aims to evaluate the culture of adipose tissue-derived mesenchymal stem cells (ADSCs), isolated from C57Bl/6 GFP + mice, in two types of polypropylene meshes (macroporous and microporous) in conventional culture plates and plates coated with methacrylate, over a period of fifteen days. The objective was to obtain the best interaction protocol between the mesh and the cells. The choice of the best method was based on adherence, maintenance of adherence and viability during culture. The amount of ADSCs adhering was checked daily by counting in a Neubauer Chamber and by using a growth curve performed with the MTT assay. The ADSCs adhering to the meshes were visualized with DAPI, panotic, hematoxylin and eosin, immunohistochemistry (integrin), and immunofluorescence (actin). ADSCs adhere to all forms of culture and to the two types of polypropylene mesh. ADSCs adhered more to the microporous mesh, within the seven day period of culture and in the plates without methacrylate. Thus, polypropylene meshes offer a good scaffold for ADSCs to adhere to.
Subject(s)
Animals , Mice , Mice/physiology , Mesenchymal Stem Cells/chemistry , Polypropylenes/analysis , Polypropylenes/chemistryABSTRACT
Tissue engineering replaces injured tissues by manipulating cells, making scaffolds, and using molecules that stimulate the tissue. Mesenchymal stem cells (MSCs) are good candidates for tissue engineering, as this is one of the cell types which are recruited to repair injured tissues. Scaffolds are structural devices that allow cell fixation and migration, with polypropylene meshes being an example. This study aims to evaluate the culture of adipose tissue-derived mesenchymal stem cells (ADSCs), isolated from C57Bl/6 GFP + mice, in two types of polypropylene meshes (macroporous and microporous) in conventional culture plates and plates coated with methacrylate, over a period of fifteen days. The objective was to obtain the best interaction protocol between the mesh and the cells. The choice of the best method was based on adherence, maintenance of adherence and viability during culture. The amount of ADSCs adhering was checked daily by counting in a Neubauer Chamber and by using a growth curve performed with the MTT assay. The ADSCs adhering to the meshes were visualized with DAPI, panotic, hematoxylin and eosin, immunohistochemistry (integrin), and immunofluorescence (actin). ADSCs adhere to all forms of culture and to the two types of polypropylene mesh. ADSCs adhered more to the microporous mesh, within the seven day period of culture and in the plates without methacrylate. Thus, polypropylene meshes offer a good scaffold for ADSCs to adhere to.
A engenharia de tecidos substitui tecidos danificados com a manipulação de células, confecção de arcabouços e a utilização de moléculas que estimulem o tecido. As células-tronco mesenquimais (MSCs) são boas candidatas para engenharia de tecido, pois são um dos tipos celulares recrutadas para a reparação de tecidos lesionados. O arcabouço deve ser um dispositivo estrutural que forneça uma estrutura para o crescimento e a diferenciação celular no sítio, sendo a tela de polipropileno um exemplo. O objetivo deste estudo foi avaliar o cultivo de células-tronco mesenquimais de tecido de adiposo (ADSCs), isoladas de camundongos C57Bl/6 GFP+, em dois tipos de telas de polipropileno (macroporosa e microporosa) em placas de cultura convencionais e revestidas com metacrilato, durante quinze dias, para obter o melhor protocolo de interação entre a tela e as células. A escolha do melhor método foi baseada na adesão, manutenção da adesão e viabilidade durante cultivo. A quantidade de ADSCs aderidas foi verificada diariamente em contagem em Câmara de Neubauer e através de uma curva de crescimento realizada através de ensaio de MTT. As ADSCs aderidas nas telas foram visualizadas com a marcação de DAPI, panótico, hematoxilina e eosina, imumo-histoquímica (integrina) e imunofluorescência (actina). Nas duas formas de cultivo e nos dois tipos de telas de polipropileno houve aderência das ADSCs. Houve maior aderência na tela microporosa, no período de sete dias de cultivo e em placas sem metacrilato. Conclui-se que a tela de polipropileno oferece um bom arcabouço para as ADSCs se aderirem.
Subject(s)
Animals , Mice , Polypropylenes/analysis , Tissue Embedding/methods , Tissue Engineering/methods , Tissue Scaffolds , Mesenchymal Stem Cells , MiceABSTRACT
BACKGROUND AND OBJECTIVE: Evaluate the antinociceptive effects of subarachnoid meloxicam on the mechanical hypernociception induced by carrageenan in rats. METHODS: Randomized controlled trial. Eighteen adult male Wistar rats underwent a cannula implantation into the subarachnoid space and were randomly divided into two groups: Group I received saline solution 5 µL, while Group II received meloxicam 30 mg. The mechanical hypernociception was induced by intraplantar injection of carrageenan and evaluated using a digital analgesy meter every 30 min during a 4-h period. The results were recorded as the Δ withdrawal threshold (in g), calculated by subtracting the measurement value after treatment from baseline. RESULTS: The Δ withdrawal threshold mean values were lower in the group of patients treated with meloxicam over all time points between 45 and 165 min, however, there was no statistical significance (p = 0.835) for this difference. CONCLUSION: Subarachnoid meloxicam at a dose of 30 µg animal-1 did not suppress the mechanical hypernociception in a model of inflammatory pain induced by intraplantar administration of carrageenan in rats. The data suggest that other dosages should be investigated the drug effect is discarded. .
JUSTIFICATIVA E OBJETIVO: Avaliar os efeitos antinociceptivos do meloxicam subaracnóideo sobre a hipernocicepção mecânica induzida pela carragenina em ratos. MÉTODOS: Estudo randômico e controlado. Dezoito ratos Wistar, machos adultos, foram submetidos à implantação de uma cânula subaracnóidea, e aleatoriamente distribuídos em dois grupos: o Grupo I (GI) recebeu 5 µL de solução salina, enquanto que ao Grupo II (GII) foram administrados 30 µg de meloxicam, ambos pela via subaracnóidea. A hipernocicepção mecânica foi induzida pela injeção intraplantar de carragenina e avaliada com o emprego de um analgesímetro digital a cada 30 minutos durante um período de 4 horas. Os resultados foram registrados como o Δ do limiar de retirada (g), calculado subtraindo-se o valor das mensurações após os tratamentos, do valor basal. RESULTADOS: Os valores médios do Δ do limiar de retirada foram menores no grupo tratado com meloxicam ao longo de todos os momentos de avaliação entre 45 e 165 minutos, contudo não foi demonstrada significância estatística (p = 0,835) para essa diferença. CONCLUSÃO: A administração subaracnóidea do meloxicam na dose de 30 µg.animal-1 não foi capaz de suprimir a hipernocicepção mecânica em um modelo de dor inflamatória induzida pela administração intraplantar de carragenina em ratos. Os dados sugerem que outras doses sejam pesquisadas antes que o efeito do fármaco seja descartado. .
JUSTIFICACIÓN Y OBJETIVO: Evaluar los efectos antinociceptivos del meloxicam subaracnoideo sobre la hipernocicepción mecánica inducida por la carragenina en ratones. MÉTODOS: Estudio aleatorizado y controlado. Dieciocho ratones Wistar, machos adultos, fueron sometidos a la implantación de una cánula subaracnoidea y aleatoriamente distribuidos en 2 grupos: el grupo I recibió 5 µl de solución salina, mientras que al grupo II se le administró 30 µg de meloxicam, ambos por vía subaracnoidea. La hipernocicepción mecánica fue inducida mediante inyección intraplantar de carragenina y fue calculada con el uso de un analgesímetro digital cada 30 min durante un período de 4 h. Los resultados fueron registrados como el Δ del umbral de retirada (g), calculado restándose el valor de las medidas posteriormente a los tratamientos, del valor basal. RESULTADOS: Los valores medios del Δ del umbral de retirada fueron menores en el grupo tratado con meloxicam en todos los momentos de evaluación entre 45 y 165 min, sin embargo, no se demostró significación estadística (p = 0,835) para esa diferencia. CONCLUSIÓN: La administración subaracnoidea del meloxicam en la dosis de 30 µg/animal-1 no fue capaz de suprimir la hipernocicepción mecánica en un modelo de dolor inflamatorio inducido por la administración intraplantar de carragenina en ratones. Los datos sugieren que deben investigarse otras dosis antes de descartar el efecto del fármaco. .